您是第 1435723 位 欢迎访问 中乔新舟官网 ! 全国免费电话:400-038-9959 我的购物车(0) 注 册 / 登 录
您当前的位置:首页 > 知识库
知识库knowledge数量:21
这样操作,轻松冻存出好细胞

一、冻存时的注意事项: 

1. 在冷冻保存之前,应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高,冻存的细胞密度为80 – 90 %最佳 

2. 冷冻前检测细胞是否保有其特有性质,例如是否有杂细胞或者支原体等。

3. 使用的DMSO 应为试剂级等级,以5~10 ml 小体积分装,4 度避光保存,勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级,以高压蒸汽 

     灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。 

4. 冷冻保存的细胞浓度: 

4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml 

4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,细胞浓度不要太高,某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后死去。 

4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6,依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 

4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。 

5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 % DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。 

二.、冻存的步骤: 

1. 冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。 

2. 使用ScienCell冻存液(货号:0133)混合均匀,置于室温下待用。 

3. 依细胞传代培养的操作,收集培养好的细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 

4. 离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 10^6 cells/ml,混合均匀,

     分装于已标示完全之冷冻保存管中,1 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。 

5. 冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 度10 分钟→ -20 度 30 分钟→ -80 度16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 

6. 冷冻保存方法2: 冷冻管置于已设定程序之等速降温机中,再放入液氮槽中。程序为: program 7: HB CELL 。

公司简介 / Company profile
上海中乔新舟生物科技有限公司
Shanghai Zhong Qiao Xin Zhou Biotechnology Co.,Ltd.
       公司主要依托复旦大学、同济大学等上海地区多家著名高校,拥有一支富有经验的开发团队,专业从事细胞及细胞...
联系我们 / Contact
电 话:021-56760357;021-56145703;021-56468627
传 真:021-56760351
邮 箱:sales@zqxzbio.com
邮 编:200439
地 址:上海市宝山区长江南路180号A区403-406室
Copyright © 2014 ZQXZBIO All rights reserved.

沪公网安备 31011002001038号

技术支持:攸攸网络 沪ICP备14008091号
在线咨询
免费热线
400-038-9959

QQ咨询
我们竭诚为您服务!