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hiPS 人诱导多能干细胞

hiPS 人诱导多能干细胞

 

hiPS 人诱导多能干细胞(货号;DF-GMP-ZB11AP-I)技术是指通过导入特定的转录因 子将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞。iPS 细胞的出现,在干细胞研究领域、表观遗传学 研究领域以及生物医学研究领域都引起了强烈的反响。 采用仙台病毒介导的外源转录因子导入,将人脐带血单核细胞诱导成 iPS 细胞。 重编程转录因 子:OCT4、SOX2、KLF4、MYC 该细胞每管含有细胞数>5×10^5 cells/ml,此细胞通过免疫荧光染色验证,经测试不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。


 


  

建议培养试剂:

培养基名称:mTeSR1 basal Medium

货号:85851

品牌:STEMCELL 5X

补充剂名称:mTeSR1 5Xsupplement

货号:85852

品牌:STEMCELL

包被液名称:Vitronectin (VTN-N)

货号:A14700

品牌:Gibco

消化液名称:ReLeSR

货号:05872

品牌:STEMCELL ROCK1

压制剂名称:Y27632

货号:72304

品牌:STEMCELL

稀释液:不含钙镁的 DPBS

温度:37℃ 气相:95%空气,5%二氧化碳

 

安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,在二级生物安全台内操作,并请注意防护。

 

细胞复苏:

  1. 六孔板需事先包被好。 操作:包被液 Vitronectin (VTN-N)100X,根据用量用不含钙镁的 DPBS 稀释后每孔加 1-1.25ml 包被液,用封口膜封上,放 4 度冰箱过夜后使用。包被好的六孔板可以在 4 度冰箱存放 2 个星期, 用之前 37 度回温。

  2. 取一个细胞冻存管,一个细胞冻存管可以复苏两个孔。

  3. 准备 3 毫升的 medium,加入 1 毫升细胞冻存液,1500rpm3 分钟。

  4. 准备复苏专用培养基:全培养基 6mL 中加入 10uM 的压制剂 Y27632(母液浓度为 10mM 11000 稀释)。

  5. 离心后去上清,加入复苏专用培养基 6ml,铺 3 个孔,次日换成不加压制剂 Y27632 的完全培养基。

  6. 每天换液:细胞密度比较稀的时候每孔换液 1.5ml,细胞密度较浓或培养基颜色变黄时,每孔换 液 2 毫升,细胞密度很浓时每孔换液 3 毫升,换液的时候吸旧培养基轻吹孔底 1-2 次,吸走旧的培 养基,加入新的培养基。


细胞传代:生长的细胞当克隆变得较大而与相邻的克隆开始融合时,这时可进行传代。 配置完全培养基:培养基和 5X 补充剂按照体积比 4:1 的量混合,RT 回温。 事先包被六孔板,操作:

  1. 包被液 Vitronectin (VTN-N)100X,根据用量用不含钙镁的 DPBS 稀释后每孔加 1-1.25ml 包被 液,用封口膜封上,放 4 度冰箱过夜后使用。包被好的六孔板可以在 4 度冰箱存放 2 个星期,用之 前 37 度回温。

  2. 吸掉完全 medium,加入 1ml/孔的 ReleSRT3 分钟。

  3. 准备包被孔,将包被液吸出,加入 1.5ml 新鲜完全培养基。

  4. 用从孔边缘吸掉 ReleS,细胞仍然成片,只是不贴附在孔底,加入 1ml 的完全培养基,吹匀吹散 细胞,吸取一定量的细胞液,按照一定稀释比例加入到新包被好的装有新鲜完全培养基的孔中。加 入细胞液后用枪立刻轻吹一次混匀,防止细胞局部密度过于大。 注:稀释比例根据传的代数而定。 初次传代 1:3,其次传代 1:6,再次传代 1:9,第 4 次传 代 1:12,第 5 次传代 1:15

  5. 每天换液:细胞密度比较稀的时候每孔换液 1.5ml,细胞密度较浓时每孔换液 2 毫升,细胞密度 很浓时每孔换液 3 毫升,换液时吸旧培养基轻吹孔底 1-2 次,吸走旧培养基,加入新的培养基。

     

    细胞冻存

  1. 吸掉完全 medium,加入 1ml/孔的 ReleSRT3 分钟;

  2. 洗掉所有 ReleS,加入冻存液,吹匀后 1 毫升/冻存管,-80 度冷冻保存。

     


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