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教你几个技巧,轻松解决细胞增殖

无论单细胞还是多细胞都是以细胞分裂的方式产生新的细胞,进行增殖,用来补充体内衰老或死亡的细胞。

     细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。

①试剂盒检测细胞代谢活性(基于mtt、cck-8等)

      mtt(噻唑蓝):通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。活细胞能将四咪唑盐(如mtt、xtt、wst-1)还原成蓝紫色的甲瓒或甲瓒盐(formazan),可通过分光光度计或酶标仪进行检测。

ScienCell MTT检测试剂盒

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      MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济.

     cell counting kit╟8 (cck-8)中的wst-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲舎染料能够溶解在组织培养 基中,生成的甲舎量与活细胞数量成正比。该试剂盒可适用于96孔板培养的贴壁或悬浮细胞。


  dna的合成的检测

    (基于brdu的免疫法或edu的点击化学法),可通过体内成像、微孔板或流式细胞术检测 等多种技术进行细胞示踪。

     dna的新组装合成是细胞生长的必要条件,故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。brdu及edu,都是胸腺嘧啶的非放射性类似物,能掺入增殖细胞的dna中,可通过对brdu及edu的检测,从而对dna的合 成量进行测定。

     

edu(5-ethynyl-2’- deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(t)渗 入正在复制的dna分子中,通过基于edu与apollo®荧光染料的特异性反应快速检测细胞dna复制活性,适用于细 胞增殖、细胞分化、生长与发育、dna修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究,尤其适合进行sirna、mirna、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

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