关于细胞标记和荧光素酶的特性，你了解多少？快搭上学霸问答顺风车，跟我们一起储备知识量吧！
一.什么是荧光素酶
荧火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)和海肾荧光素酶(Rellina Luciferase)组成双荧光素酶报告基因实验系统（Dual-Luciferase Reporter Assay）。通过加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应过程中会发出生物荧光，然后可以通过化学发光仪测定反应过程中释放的生物荧光，从而比较不同组间基因表达的差异。中乔新舟用的是萤火虫荧光素酶，renilla是海肾。
二.下面给大家普及一下可能会遇到的问题：
1.在体外的细胞培养中，为什么要经常用抗生素筛选？
在体外的细胞培养中，为什么要经常用抗生素筛选？体外培养过程中，不筛选也可以，只要时间不是很长， 接种代数不要很多。到目前为止，还没有发现基因丢失的情况。但若接种的代数过多，建议用药物筛选一段时间或从原始的细胞株培养以保证细胞发光的强度，中乔新舟的LUC 、GFP 、RFP及双标记都使用puro抗性筛选。
2.底物荧光素(Luciferin）是如何进入小鼠体内的？需要多少？
荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的，约一分钟就可以扩散到小鼠全身。常用方法是腹腔注射，扩散较慢，开始发光慢，持续发光长。若进行荧光素静脉注射，扩散快，开始发光快，但发光持续时间很短。大部分发表的文章中，荧光素的浓度是150mg/kg 。20克的小鼠约需3mg的荧光素。
3.荧光素酶的发光特性如何？
通过腹腔注射老鼠后约一分钟左右荧光素酶就开始发光，通常十分钟后强度达到稳定的最高点。在最高点通常持续约20-30分钟后开始衰减，约三小时后发光全部消失。通常最好的检测时间是在注射后15 - 35分钟之间，但建议实验人员在做不同实验模型前进行连续时间点发光曲线的绘制，以确定最高稳值的时间范围。
荧光素酶基因是插到细胞染色体上的，当细胞分裂、转移、分化时, 荧光酶也会得到持续稳定的表达。
丢失的可能性及量非常小，不会影响实验结果。有一些实验报道的结果中，标记的细胞在动物体内存活几年的时间还可以持续发光，说明 Luciferase 基因的标记非常稳定。
可以先用标记的细胞在皮下接种，然后从皮下取出肿瘤块进行原位接种。
有关，启动子的活性高，则荧光素酶的表达高，启动子的活性低，则荧光素酶的表达低。
三.都有哪些细胞株提供
图1. PC-9和PC-9-gfp-luc细胞传代后Luciferase荧光值检测结果
注：
1.建议后期用含puro（2~4ug/ml）的完全培养基维持培养；
2.强烈建议收到细胞后先进行细胞体外分析，及时向我们反馈；
3.由于本实验室没有进行动物实验检测，请务必在动物实验前再次进行细胞体外分析，以免耽误实验；
4.检测试剂盒使用Promega Bright-Glo Luciferase Assay System。
5.可以提供luc标记的定制服务 周期是3-4周
上海中乔新舟生物科技有限公司
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