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基因敲除小鼠

基因敲除小鼠
2013年1月份，美国两个实验室在《Science》杂志发表了基于Crispr-Cas9技术在细胞系中进行基因敲除的新方法，一种全新的人工核酸内切酶clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9出现，它主要是基于细菌的一种获得性免疫系统改造而成，其特点是制作简单，作用效果高。

技术原理：

CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是一种广泛存在于细菌与古细菌中的，由RNA介导的可遗传的获得性免疫系统，这种免疫系统为宿主细胞提供了对外源DNA（如噬菌体质粒）的免疫功能。
此系统的工作原理是CrRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA (trans-activating RNA)结合形成tracrRNA/crRNA复合物，次复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与CrRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。而通过人工设计这两种RNA，可以改造形成具有引导作用的SgRNA (short guide RNA)，足以引导Cas9对DNA的定点切割。中乔新舟目前已经成功将此技术应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备，以及条件性敲除（Loxp系统）模型的制备。
CRISPR/Cas9技术特点：
1、可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除；
2、可对基因进行定点修饰（Tag、GFP、RFP、点突、条件性敲除）；
3、试验周期短、价格低、效率高；
4、可应用于大、小鼠等。